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金霉素对患病黄颡鱼肾脏中分离菌株的抑、杀菌效果文/华中农业大学陈昌福
武汉科研时代生物技术有限公司周鑫军、油九菊
浙江省舟山市海洋与渔业局夏枫峰
摘要：本文报告采用含量为92.0%的金霉素（chlortetracycline）原料药、20.0%的金霉素制剂与含量为13.0%~15.0%的金霉素预混剂，对从患病黄颡鱼肾脏中分离菌株进行的抑菌试验结果。含量为92.0%的金霉素A、B原料药对患病黄颡鱼肾脏分离菌株的MIC均为0.20mg/L，20.0%的金霉素制剂的MIC为0.39mg/L，而采用1.0%的HCl预溶后的13.0%~15.0%的金霉素预混剂，对相同菌株的MIC为1.56mg/L。将醋作为13.0%~15.0%的金霉素预混剂溶媒是可行的，当醋的添加量达到12.0%的浓度时，预溶效果与添加1.0%的HCl预溶效果相似，当醋添加量继续提高后，13.0%~15.0%的金霉素预混剂对患病黄颡鱼肾脏分离菌株的MIC，没有继续出现增强的效果。
我们的试验结果已经证明，含量为93.0%的金霉素（chlortetracycline）原料药与含量为13.0%~15.0%的金霉素预混剂，对危害海、淡水养殖鱼类的鰤诺卡氏菌（Nocardiaseriolae）等致病菌均具有比较好的抑、杀菌效果[1]。
本研究利用从患病黄颡鱼肾脏中分离的菌株，完成对92.0%的金霉素原料药、20.0%的金霉素制剂与含量为13.0%~15.0%的金霉素预混剂的药物敏感性检测，旨在探讨将金霉素用于治疗养殖黄颡鱼细菌性疾病药物的可能性。因为试验获得了比较好的结果，现将其报告如下。
01材料与方法
1.1供试药物及药液制备
本研究采用市售的含量为92.0%的金霉素原料药、20.0%的金霉素制剂和含量为13.0%~15.0%的预混剂。将92.0%的金霉素原料药和20.0%的金霉素制剂采用蒸馏水配制成.0mg/L浓度后作为供试液体后，备用；对于含量为13.0%~15.0%的预混剂，采取两种溶剂作为预溶剂，一是采用盐酸（HCl，36.0%）作为金霉素预混剂的溶媒，按照盐酸终浓度为1.0%剂量添加在金霉素预混剂溶液中，将其中的金霉素溶解后，再用蒸馏水将药液稀释至.0mg/L的浓度，备用；二是采用食用醋作为金霉素预混剂的溶媒，在药液中的添加量达到终浓度为1.0%、5.0%、10.0%、12.0%、14.0%、16.0%、18.0%和20.0%，将其中的金霉素溶解后，再用蒸馏水将药液稀释至.0mg/L的浓度，备用。
1.2致病菌的培养及其菌液制备
将出现溃疡等症状的患病黄颡鱼肾脏中离致病菌株，经过分离纯化后，采用脑心浸液琼脂（BHIA，Difco）培养基进行培养细菌。在接种在平板中的致病菌株，置于28℃的恒温培养箱中培养72h后，采用灭菌生理盐水分别洗下菌落，配置成cfu/mL菌液浓度，置于4℃冰箱中备用。
1.3最小抑菌浓度（MIC）测定
参照日本化学疗法学会制定的标准法进行[2]。在无菌条件下，取定量的药液，在盛有灭菌脑心浸液（BHI，Difco）培养基试管中，做2倍系列的稀释。制作成药物浓度分别为.0mg/L、50.0mg/L、25.0mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.13mg/L、1.56mg/L、0.78mg/L、0.39mg/L、0.20mg/L和0.10mg/L的药物系列培养基试管。最后，定量吸取0.1mL浓度约为1.2×cfu/mL活菌液加入上述每支试管中，摇匀。置于28℃条件下恒温培养72h，经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度（minimuminhibitoryconcentration，MIC）。
02结果
2.1不同剂型金霉素对患病黄颡鱼分离菌株的抑菌效果
含量为92.0%的金霉素A、B原料药、20.0%的金霉素制剂与含量为13.0%~15.0%的金霉素预混剂，对从患病黄颡鱼肾脏中分离的菌株的MIC如图1所示。从图1可以看出，92.0%的金霉素A、B原料药对患病黄颡鱼肾脏分离菌株的MIC均为0.20mg/L，20.0%的金霉素制剂的MIC为0.39mg/L，而采用1.0%的HCl预溶后的13.0%~15.0%的金霉素预混剂，对相同菌株的MIC为1.56mg/L。
图1不同金霉素制剂对患病黄颡鱼肾脏中分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）
2.1醋作为预溶剂对金霉素抑菌效果的影响
在13.0%~15.0%的金霉素预混剂中添加不同浓度的醋后，对患病黄颡鱼肾脏分离菌株的MIC检测结果如图2所示。由图2所示结果可以看出，醋作为13.0%~15.0%的金霉素预混剂溶媒是可行的，当在预混剂中的添加量达到12.0%的浓度时，对13.0%~15.0%的金霉素预混剂的预溶效果与添加1.0%的HCl预溶效果相似（图1）。但是，当醋的添加量继续提高后，13.0%~15.0%的金霉素预混剂对患病黄颡鱼肾脏分离菌株的MIC，则没有继续出现增强的效果。
03讨论
我们完成的抑菌试验结果已经证明，从患病黄颡鱼肾脏中分离的致病菌对我国允许使用的几种渔用抗生素药物，已经产生了较强的耐药性（资料未发表）。
本研究采用不同剂型的金霉素，对从患病黄颡鱼肾脏中分离菌株完成的药敏检测结果表明，这些菌株对于不同剂型的金霉素均比较敏感。因为含量为92.0%的金霉素A、B原料药和20.0%的金霉素制剂，在水中的溶解度比较好，在用药前无须采用预溶剂对药物近预溶，而含量为13.0%~15.0%的金霉素预混剂难溶于水，在使用之前需要对其进行预溶。采用HCl等化学药物作为这种药物的预溶剂，已经证明有比较好的效果。但是，水产养殖业者在实际操作的过程中，有可能会出现安全等方面的问题。
本研究采用醋作为13.0%~15.0%的金霉素预混剂的溶媒，试验结果证明了是有效果的，而且还证明了当醋在13.0%~15.0%的金霉素预混剂中的添加量达到12.0%时，其预溶效果是最好的。
参考文献
[1]陈昌福，周鑫军，油九菊、夏枫峰.鰤诺卡氏菌对金霉素类药性的研究.水产前沿，，5，74~76.
[2]日本化学疗法学会.最小发育阻止浓度の测定方法[J].化学疗法，，23（8）：1~2.
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